核酸分子雜交儀使用說(shuō)明

進(jìn)口醫(yī)用全自動(dòng)核酸分子雜交箱概念及原理

概念：核酸分子雜交是根據(jù)堿基互補(bǔ)原理，應(yīng)用已知序列的分子探針檢測(cè)待測(cè)單鏈核酸片段堿基序列的分子生物學(xué)技術(shù)，目前廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)生物化學(xué)病毒檢測(cè)疾病診斷基因工程等學(xué)科領(lǐng)域中原理：核酸的Walson-Crick堿基互補(bǔ)配對(duì)原則（即A=T,GC）核酸分子雜交儀。上海峰志儀器有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)美國(guó)UVP hb-1000分子雜交箱。

核酸分子雜交技術(shù)的分類
核酸分子雜交技術(shù)可按雜交環(huán)境分為固相雜交和液相雜交兩大類
1固相雜交

固相雜交即先將待測(cè)單鏈核酸樣品結(jié)合到支持物（常用有硝酸纖維素濾膜尼龍膜化學(xué)活化膜等）上，然后與溶液中的已知序列的標(biāo)記探針進(jìn)行雜交。固相雜交的特點(diǎn)：固相雜交后，未雜交的游離片段易除去，從而使膜上留下的雜交分子較易檢測(cè)，并可有效避免靶DNA自我復(fù)性故固相雜交技術(shù)zui為常用。
常用的固相雜交類型有：菌落原位雜交斑點(diǎn)雜交狹縫雜交Southern印跡雜交Northern印跡雜交組織原位雜交和夾心雜交等。
2、液相雜交
液相雜交是指待測(cè)核酸和探針都存在于雜交液中，探針于待測(cè)核酸在液體環(huán)境中按照堿基互補(bǔ)配對(duì)形成雜交分子的過(guò)程液相雜交是研究zui早的雜交類型，但應(yīng)用的普遍程度較固相雜交為低。

液相雜交的特點(diǎn)：無(wú)需支持物待測(cè)核酸分子不用固定在支持物上其弊端是由于雜交后過(guò)量的未雜交探針存在于溶液中，在已有雜交結(jié)合物檢測(cè)水平條件下檢測(cè)誤差較高故液相雜交在過(guò)去較少應(yīng)用近年來(lái)由于雜交檢測(cè)技術(shù)的不斷進(jìn)步，商業(yè)檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā)等液相雜交技術(shù)得到了迅速發(fā)展。

常用的液相雜交類型有：吸附雜交發(fā)光液相雜交液相夾心雜交復(fù)性速率液相分子雜交。
原位分子雜交實(shí)際上是固相雜交中的一種形式，雜交過(guò)程中待測(cè)DNA處于未經(jīng)抽提的染色體之上，并在原位置上被變性成單鏈，與探針進(jìn)行分子雜交。
原位分子雜交與其他雜交技術(shù)主要區(qū)別在于待測(cè)堿基序列位于染色體上其主要特點(diǎn)是可以準(zhǔn)確定位目的DNA在染色體上的位置因此在分子遺傳學(xué)研究癌基因定位遺傳性疾病臨床診斷方面具有重要而廣泛應(yīng)用。

美國(guó)UVP HB-1000核酸分子雜交儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1.目的
保證核酸分子雜交儀的正確和正常使用。
2.范圍
美國(guó)進(jìn)口HB-1000核酸分子雜交儀的使用
3.職責(zé)
實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部持有PCR上崗證的人員負(fù)責(zé)儀器的使用、維護(hù)。
4.工作流程
4.1 日常使用
4.1.1 本儀器適用溫度為0-40℃，適用濕度為≤90%。
4.1.2 液晶顯示界面
正常狀態(tài)顯示主界面，顯示內(nèi)容對(duì)應(yīng)實(shí)時(shí)溫度、轉(zhuǎn)速、定時(shí)倒計(jì)時(shí)時(shí)間和提示狀態(tài)等信息，當(dāng)進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)定時(shí)，則顯示參數(shù)設(shè)定界面。
4.1.3 面板界面及按鍵操作說(shuō)明
a）“設(shè)定”鍵，按該鍵進(jìn)入“設(shè)定參數(shù)”界面，再通過(guò)按“△”或“▽”鍵選擇需要設(shè)定的“設(shè)定溫度”“旋轉(zhuǎn)速度”“定時(shí)時(shí)間”參數(shù)，當(dāng)光標(biāo)移動(dòng)到對(duì)應(yīng)參數(shù)后，再按“設(shè)定”鍵，則進(jìn)入到對(duì)應(yīng)的參數(shù)設(shè)定，在參數(shù)設(shè)定時(shí)間完成后，按“設(shè)定”鍵，則保存相應(yīng)的設(shè)置。
b）“△”或“▽”鍵，用于調(diào)整參數(shù)設(shè)定項(xiàng)目或在參數(shù)設(shè)定時(shí)調(diào)節(jié)設(shè)定參數(shù)值的大小，每按一次上下移動(dòng)一欄或數(shù)值增加較少1。
c）“?”鍵，用于參數(shù)設(shè)定時(shí)調(diào)節(jié)參數(shù)設(shè)定的某一位，自右向左循環(huán)，每按一次移動(dòng)一位。
d）“返回”鍵，參數(shù)都設(shè)定完畢后，按一下“返回”鍵，返回到主界面。
e）“消音”鍵，當(dāng)有提示信號(hào)出現(xiàn)時(shí)，按“消音”鍵，聲提示消失，提示指示燈仍然保持，同時(shí)液晶屏顯示“消音”
f）“啟動(dòng)”鍵和“停止”鍵，通過(guò)操作“啟動(dòng)”、“停止”鍵，可控制轉(zhuǎn)架的運(yùn)行與停止，對(duì)應(yīng)運(yùn)行指示燈處于“亮”、“滅”狀態(tài)。
g）“復(fù)位”鍵，如需要重新計(jì)時(shí)或重新開(kāi)展一批雜交實(shí)驗(yàn)時(shí)，可按“復(fù)位”鍵，則電機(jī)停止轉(zhuǎn)動(dòng)，溫度保持設(shè)定溫度，定時(shí)時(shí)間恢復(fù)到初始設(shè)定狀態(tài)。

 4.1.4 使用方法
a）使用前準(zhǔn)備，打開(kāi)箱門，取出轉(zhuǎn)架，將離心管或雜交瓶插入轉(zhuǎn)架中，應(yīng)均衡放置。
b）將裝好試樣的轉(zhuǎn)架安裝到儀器上，觀察轉(zhuǎn)架是否固定到位。
c）檢查無(wú)誤后，關(guān)上箱門，打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，電源指示燈亮，設(shè)定工作溫度、旋轉(zhuǎn)速度、定時(shí)時(shí)間等參數(shù)。（儀器具有設(shè)定參數(shù)記憶功能，下次實(shí)驗(yàn)如參數(shù)相同時(shí)，可不需修改參數(shù)）
d）按一下“運(yùn)行”按鈕，運(yùn)行指示燈亮，儀器即按照設(shè)定的參數(shù)運(yùn)行，箱體內(nèi)開(kāi)始加溫，轉(zhuǎn)軸裝置按設(shè)定的速度旋，定時(shí)時(shí)間開(kāi)始以0.1min為步長(zhǎng)倒計(jì)時(shí)，定時(shí)時(shí)間到時(shí)，儀器發(fā)出聲音提示，并停止加熱和轉(zhuǎn)動(dòng)。
e）實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需停止轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)，可按一下“停止”鍵，則轉(zhuǎn)架停止轉(zhuǎn)動(dòng)，箱體保持恒溫，調(diào)整工作完成后，再按一下“運(yùn)行”鍵，轉(zhuǎn)架繼續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)，定時(shí)器只有在電機(jī)正常旋轉(zhuǎn)時(shí)工作。
f）實(shí)驗(yàn)結(jié)束，按一下“停止”鍵，打開(kāi)箱門，取出樣品。
g）如進(jìn)行下一組樣品的試驗(yàn)，按一下“復(fù)位”按鈕，初始化定時(shí)時(shí)間，重復(fù)上述操作。

4.2 儀器保養(yǎng)
在核酸分子雜交儀的使用過(guò)程中，請(qǐng)嚴(yán)格按照本操作規(guī)程規(guī)定的運(yùn)行環(huán)境和操作步驟使用，每次使用后需及時(shí)清理工作室，保持儀器外觀整潔，但需避免使用強(qiáng)酸、堿等腐蝕性清潔劑及有機(jī)溶劑清潔。

4.3 儀器的校準(zhǔn)
溫度檢測(cè)方法：用經(jīng)過(guò)驗(yàn)定合格，測(cè)量范圍為0-100℃的玻璃水銀溫度計(jì)。
4.3.1設(shè)定一個(gè)溫度控制值（高于室內(nèi)溫度5-80℃），調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速，運(yùn)行儀器30min，直到顯示的數(shù)值和設(shè)定的數(shù)值一致。
4.3.2透過(guò)門上的玻璃，觀察溫度計(jì)上顯示的刻度，獲得箱內(nèi)的準(zhǔn)確溫度。
4.3.3比較這兩個(gè)數(shù)值，如相差1℃以上，請(qǐng)于廠家聯(lián)系。
4.4 故障分析與處理
4.4.1打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，儀器電源指示燈不亮，應(yīng)首先檢查儀器電源連接是否良好，如連接良好，請(qǐng)切斷電源線，并用工具打開(kāi)保險(xiǎn)絲座，查看保險(xiǎn)絲是否斷路，如保險(xiǎn)絲故障，請(qǐng)及時(shí)更換保險(xiǎn)絲。
4.4.2在通電狀態(tài)下，當(dāng)本設(shè)備不能正常工作時(shí)，請(qǐng)先觀察設(shè)定溫度設(shè)定是否超過(guò)環(huán)境溫度+5℃，如未超過(guò)請(qǐng)重新設(shè)置。
4.4.3如出現(xiàn)超溫提示，先待箱體溫度冷卻至設(shè)定溫度以下后，再重新觀察，如果仍然出現(xiàn)， 則一般為設(shè)備故障。
4.4.4如排除上述問(wèn)題，儀器仍不能正常工作，請(qǐng)及時(shí)與廠家聯(lián)系維修。

美國(guó)UVP HB-1000核酸分子雜交儀操作注意事項(xiàng) 

分子雜交儀又稱分子雜交爐、分子雜交箱，根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)的需要可以選擇不同的規(guī)格型號(hào)。它是現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室采用雜交技術(shù)的理想設(shè)備，可替代塑料雜交袋和水浴搖床，從而避免雜交袋破損帶來(lái)的污染危險(xiǎn)。雜交爐具有微機(jī)控溫，爐內(nèi)空氣循環(huán)裝置設(shè)計(jì)獨(dú)特，升溫速度快等特點(diǎn)。

分子雜交儀由箱體、雜交瓶轉(zhuǎn)架或離心管轉(zhuǎn)架、雜交管、搖床、隔膜、電腦控制系統(tǒng)等部件組成，如圖所示。不同型號(hào)的箱體容納的管子數(shù)、微孔版數(shù)、載玻片數(shù)和平板數(shù)也不同。
核酸分子雜交技術(shù)根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，在一定條件下用標(biāo)記的已知DNA或RNA片段（探針）來(lái)檢測(cè)樣本中是否有待測(cè)的核酸序列 [1] 。
生理?xiàng)l件下DNA呈穩(wěn)定的雙鏈螺旋結(jié)構(gòu)，在體外，當(dāng)有變性因素存在時(shí)(如溫度超過(guò)65℃、含胺或極端pH時(shí))，DNA分子內(nèi)部的氫鍵斷裂，解離成兩條單鏈DNA，這種現(xiàn)象稱為變性。在除去變性因素后，單鏈DNA能通過(guò)堿基互補(bǔ)再結(jié)合成穩(wěn)定的雙鏈螺旋結(jié)構(gòu)，此過(guò)程稱為復(fù)性或退火。

在復(fù)性過(guò)程中，若存有與樣本核酸某部分序列相同或高度同源的外源性單鏈DNA片段或寡核苷酸(一般為17～45個(gè)堿基)時(shí)，兩者可通過(guò)互補(bǔ)堿基形成雜交體，即雙鏈DNA分子，這一過(guò)程稱為雜交。用一段已知的DNA片段加入復(fù)性的DNA中，若能夠結(jié)合成雙鏈分子，說(shuō)明樣本中含有已知的DNA序列。

核酸分子雜交不僅發(fā)生在DNA與DNA之間，也可發(fā)生在RNA與RNA、RNA與DNA之間。生成的雜交體分別為 DNA-DNA、 RNA-RNA或 RNA-DNA的雙鏈結(jié)構(gòu)

注意事項(xiàng):
1. 分子雜交儀需要安裝在有良好接觸的電源插座上。
2. 恒溫室處于高溫狀態(tài)下裝取雜交管時(shí)，注意不要燙傷。
3. 雜交管在裝入反應(yīng)液前一定要清洗干凈，裝入反應(yīng)液及反應(yīng)膜后一定要擰緊瓶蓋，以免漏液。
4. 在進(jìn)行同位素標(biāo)記的雜交實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須檢查雜交管的密封情況，以免造成污染。一旦發(fā)生污染，請(qǐng)及時(shí)告知有關(guān)部門的使用人員和檢修人員，盡可能的減少不必要的傷害。
5. 由于分子雜交儀設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)緊湊，密封性要求高，所以在儀器運(yùn)行中出現(xiàn)故障需要檢修時(shí)，應(yīng)切斷電源由專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行。