如何觀察檢驗熒光微球的熒光？

如何觀察熒光微球的熒光？

檢驗熒光微球是否有熒光，可以用美國路陽LUYOR-3415RG熒光激發(fā)光源來測試，如果是綠色熒光微球，采用LUYOR-3415熒光激發(fā)光源的藍(lán)色光源照射，佩戴LUV-30A熒光觀察眼鏡觀察。如果是紅色熒光微球，采用LUYOR-3415熒光激發(fā)光源的綠色光源照射，佩戴LUV-50A熒光觀察眼鏡觀察。LUYOR-3415RG熒光激發(fā)光源內(nèi)置了12顆大功率led，照射面積大，激發(fā)熒光亮度高，觀察效果好，如果您是科研院所，想試用美國路陽的熒光激發(fā)光源，可以聯(lián)系上海峰志儀器有限公司申請樣機(jī)試用。

熒光微球的熒光激發(fā)效果：

上圖為綠色熒光微球在LUYOR-3415RG激發(fā)光源照射下的熒光效果

上圖為綠色熒光微球在LUYOR-3415RG激發(fā)光源照射下的熒光效果

何為熒光微球(Fluorescent microsphere)？

熒光微球: 熒光微球通常是指形狀為球形，直徑在幾納米至幾十微米之間，微球表面或內(nèi)部負(fù)載有熒光物質(zhì)，在受到一定的能量激發(fā)時能夠發(fā)出熒光的微粒。與純熒光化合物相比，熒光微球具有相對穩(wěn)定的發(fā)光行為和形態(tài)結(jié)構(gòu)。目前，已經(jīng)有能夠制備各種各樣的粒徑從納米級到亞微米級的熒光微球。熒光微球有比較穩(wěn)定的形態(tài)結(jié)構(gòu)及發(fā)光行為，受溶劑、熱、電、磁等外界條件的影響比純熒光化合物小很多。

綠色熒光微球是用于體外診斷、血流測定、成像，以及流式細(xì)胞儀校準(zhǔn)的微球。綠色熒光微球填充了高性能的油溶性熒光染料，靈敏度高，穩(wěn)定性高。

熒光微球作為一種特殊的功能微球，由于在單個微球中富集了能夠發(fā)射熒光的有機(jī)或無機(jī)物質(zhì)，除具有無機(jī)物和有機(jī)物的性能外，同時在外界能量刺激下還能發(fā)射熒光。熒光微球粒度均一、單分散性好、穩(wěn)定性好、發(fā)光效率高，微球表面弧度有利于抗原決定簇和抗體結(jié)合位點的暴露面處于佳的反應(yīng)狀態(tài)，因此在眾多領(lǐng)域都具有廣泛的應(yīng)用，如生物化學(xué)、生物醫(yī)藥、臨床醫(yī)學(xué)、基因分析以及光學(xué)儀器等，其中熒光微球在醫(yī)藥、生物方面的應(yīng)用尤為重要。

通過在聚合物微球表面或內(nèi)部引入一種或多種熒光物質(zhì)制備的熒光微球，早被用作校準(zhǔn)流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡的熒光標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)微球，后逐漸被應(yīng)用到細(xì)胞標(biāo)記、生物分子標(biāo)記及在活性條件下的示蹤，也可固定蛋白質(zhì)分子等，并跟蹤其功能化過程。

熒光微球能夠攜帶許多熒光分子，較弱的刺激就可以引發(fā)較強(qiáng)的信號，所以只需要少量的低能輻射就能產(chǎn)生熒光信號，避免了使用傳統(tǒng)的放射性微球造成的輻射危險，并在不損失檢測靈敏度的前提下降低了成本。已經(jīng)產(chǎn)業(yè)化的熒光微球，使得高通量免疫分析、藥物篩選、固定化酶等領(lǐng)域的技術(shù)發(fā)展上了一個臺階，熒光微球作為診斷試劑應(yīng)用于免疫分析已是一個必然。熒光微球在生物樣品檢測中作為不同檢測對象的固定化載體，不同熒光微球?qū)?yīng)不同的捕獲抗體，識別不同的抗原，從而實現(xiàn)多種待測抗原定性及定量檢測。我們期待著這一技術(shù)走向成熟和發(fā)展。

熒光微球用于核酸檢測

利用不同顏色的上轉(zhuǎn)發(fā)光材料編碼的微球可用于結(jié)合不同的報告標(biāo)簽，當(dāng)結(jié)合上單鏈的DNA之后，熒光強(qiáng)度會顯示不同。利用類似的方法，將上轉(zhuǎn)發(fā)光的納米顆粒包裹在聚苯乙烯的微球內(nèi)部，調(diào)整上轉(zhuǎn)納米顆粒（不同發(fā)射波長）的比例，可以獲得不同的熒光編碼微球。上轉(zhuǎn)發(fā)光編碼微球與報告分子的染料標(biāo)記沒有光學(xué)交叉，因此標(biāo)記染料到熒光波長可選擇范圍很寬。量子點編碼的微球也可用于結(jié)合目標(biāo)DNA分子，利用微流控芯片的層流以及外部的磁力，報告分子、清洗劑通過磁力的作用產(chǎn)生了三股流體，利用量子點標(biāo)記的微球，進(jìn)行雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)之后的信號出現(xiàn)增強(qiáng)的現(xiàn)象，因此量子點編碼的微球可以用于在人的肺癌細(xì)胞中進(jìn)行miRNA的過表達(dá)的多重檢測（圖2所示）。

熒光微球用于蛋白質(zhì)檢測

多重顏色的量子點結(jié)合的微球廣泛被證實能夠用于多重抗原的同時檢測，包括IgG，腫瘤標(biāo)志物，病原標(biāo)志物等，使用上轉(zhuǎn)換納米顆粒以及攜帶磁性納米納米顆粒標(biāo)記的微球可以同時檢測兩種不同的抗原。基于微流控技術(shù)，利用AFP （ FEMMs 熒光編碼的磁珠） 對Fe3O4納米顆粒的磁性富集以及分離（高溫化學(xué)溶脹的方式），量子點以及Fe3O4納米顆粒與微球的通過高分子鏈端或者疏水作用進(jìn)行有效的結(jié)合，該技術(shù)也廣泛的應(yīng)用于一些多重生物標(biāo)志物的檢測。

熒光微球用于細(xì)菌檢測

傳統(tǒng)的細(xì)菌檢測（例如微量肉湯稀釋法或者E-測試）所需時間周期長，因此需要開發(fā)能夠快速以及高效地對多重細(xì)菌進(jìn)行檢測。Ozcan組利用了聚苯乙烯微球能夠快速對寄生于人角膜以及結(jié)膜的金黃色葡萄球菌進(jìn)行快速的計數(shù)。Wang課題組將熒光微球與萬古激素（vancomycin）進(jìn)行孵育，通過氫鍵與細(xì)菌細(xì)胞壁上的連接酶進(jìn)行結(jié)合，通過熒光磁珠微球的擴(kuò)散方式來有效識別溶液中活細(xì)菌或者死細(xì)菌。

基于POCT平臺的熒光微球的檢測

Im使用智能手機(jī)的方式分析免疫微球的衍射圖案，從而不同生化目標(biāo)的檢測，包括一些可溶解的蛋白、核酸以及細(xì)胞水平的蛋白。但是這個技術(shù)非常依賴于手機(jī)的攝像頭的分辨率，除此之外，該檢測方式也依賴于不同手機(jī)品牌，這些會極大的限制了該技術(shù)達(dá)到應(yīng)用以及推廣（如圖a所示）。Ming課題組為了分析微球的熒光信號，整合了一些光學(xué)元器件（例如激發(fā)光源、透鏡、光學(xué)濾片以及其他的電子元器件）開發(fā)了一套智能手機(jī)的檢測設(shè)備。標(biāo)記了不同顏色量子點的微球被捕獲在玻璃芯片的孔洞中，從而形成了微球陣列芯片用于快速檢測多重抗原物質(zhì)。該方案在文中被用于檢測七種抗原物質(zhì)，利用上轉(zhuǎn)換納米顆粒結(jié)合微球的方式來快速檢測不同種類的霉菌毒素。

上海峰志儀器有限公司銷售的LUYOR-3415RG熒光激發(fā)光源能夠激發(fā)綠色熒光微球、紅色熒光微球的發(fā)出熒光。